هدف :
آماده سازی ژل های Sephadex از پودر آن , جهت آماده کردن ستون کروماتوگرافی
آماده سازی ژل های Sephadex از پودر آن , جهت آماده کردن ستون کروماتوگرافی
کاربرد :
این دستورالعمل در مواردی که برای تهیه و آماده سازی ستون کروماتوگرافی ژل آماده وجود ندارد , استفاده میشود .
این دستورالعمل در مواردی که برای تهیه و آماده سازی ستون کروماتوگرافی ژل آماده وجود ندارد , استفاده میشود .
مواد و تجهیزات :
۱- ارلن تخلیه 2 عدد
۲- شیلنگ سیلیکون 2 عدد
۳- درب لاستیکی متناسب با دهنه ارلن تخلیه شماره 1
۴- درب لاستیکی سوراخ دار متناسب با دهنه ارلن تخلیه شماره 2
۵- ترازو
۶- پودر ژل Sephadex
۷- اب مقطر
۸- پمپ خلأ
۹- بن ماری
۱۰- ارلن یا بشر متناسب با حجم مورد نیاز ژل
۱- ارلن تخلیه 2 عدد
۲- شیلنگ سیلیکون 2 عدد
۳- درب لاستیکی متناسب با دهنه ارلن تخلیه شماره 1
۴- درب لاستیکی سوراخ دار متناسب با دهنه ارلن تخلیه شماره 2
۵- ترازو
۶- پودر ژل Sephadex
۷- اب مقطر
۸- پمپ خلأ
۹- بن ماری
۱۰- ارلن یا بشر متناسب با حجم مورد نیاز ژل
ملاحظات ایمنی :
۱- برای جلوگیری از خطرات بیولوژیک , الرژیک و شیمیایی , پوشیدن روپوش و کفش و دستکش ضروری می باشد .
۲- از سالم و بدون ترک بودن ارلن تخلیه مطمئن شویم .
۱- برای جلوگیری از خطرات بیولوژیک , الرژیک و شیمیایی , پوشیدن روپوش و کفش و دستکش ضروری می باشد .
۲- از سالم و بدون ترک بودن ارلن تخلیه مطمئن شویم .
روش کار :
۱- پودر ژل مورد نیاز را توزین نمایید .
۲- اب مقطر ( به اندازه سه برابر ژل مورد نیاز) را در بشر یا ارلن بریزید .
۳- پودر ژل را به آرامی داخل بشر , روی اب مقطر اضافه کنید .
۴- یک تا دو ساعت اجازه بدهید ژل خیس بخورد .
۵- بشر حاوی ژل را در بن ماری بگذارید .
۶- بن ماری را روی 80 درجه سانتیگراد تنظیم نمایید .
۷- دو الی سه ساعت در این حالت بماند .
۸- ژل داخل بشر یا ارلن را به ارامی به هم بزنید .(ژل را به وسیله چرخش ظرف به هم بزنید,زیرا ذرات ژل بسیار شکننده می باشد .)
۹- اجازه دهید کمی ژل ته نشین شود .
۱۰- ذرات کوچکتر ژل که احیانا شکسته شده اند در این مرحله به علت کوچکی اندازه دیرتر رسوب می کنند . سعی کنید محلول روی ژل را که حاوی این ذرات می باشند , از ظرف به بیرون بریزید .
۱۱- مراحل 8 الی 10 را سه بار انجام دهید .
۱۲- خیلی اهسته ژل و محلول روی آن را به درون ارلن تخلیه شماره 1 انتقال دهید .
۱۳- درپوش لاستیکی را به دهنه ارلن تخلیه شماره 1 بزنید .
۱۴- یک طرف شیلنگ سیلیکون را به خروجی ارلن تخلیه شماره 1 و سر دیگر آن را به درپوش لاستیکی سوراخ دار محکم نمایید . و درپوش را در دهنه ارلن تخلیه شماره 2 محکم نمایید .
۱۵- شیلنگ دوم را به خروجی ارلن تخلیه شماره 2 متصل نموده , سر دیگر آن را به پمپ خلأ وصل نمایید .
۱۶- پمپ را جهت بیرون بردن هوای داخل منافذ ژل و همچنین محلول روشن نمایید .
۱۷- ابتدای این کار خروج هوا خیلی زیاد است و کم کم خروج هوا کمتر می شود .
۱۸- تا جایی که قل قل کردن آن کم شود , این کار را ادامه دهید .
۱۹- حال ژل آماده است تا آن را وارد ستون کروماتوگرافی کنیم .
۱- پودر ژل مورد نیاز را توزین نمایید .
۲- اب مقطر ( به اندازه سه برابر ژل مورد نیاز) را در بشر یا ارلن بریزید .
۳- پودر ژل را به آرامی داخل بشر , روی اب مقطر اضافه کنید .
۴- یک تا دو ساعت اجازه بدهید ژل خیس بخورد .
۵- بشر حاوی ژل را در بن ماری بگذارید .
۶- بن ماری را روی 80 درجه سانتیگراد تنظیم نمایید .
۷- دو الی سه ساعت در این حالت بماند .
۸- ژل داخل بشر یا ارلن را به ارامی به هم بزنید .(ژل را به وسیله چرخش ظرف به هم بزنید,زیرا ذرات ژل بسیار شکننده می باشد .)
۹- اجازه دهید کمی ژل ته نشین شود .
۱۰- ذرات کوچکتر ژل که احیانا شکسته شده اند در این مرحله به علت کوچکی اندازه دیرتر رسوب می کنند . سعی کنید محلول روی ژل را که حاوی این ذرات می باشند , از ظرف به بیرون بریزید .
۱۱- مراحل 8 الی 10 را سه بار انجام دهید .
۱۲- خیلی اهسته ژل و محلول روی آن را به درون ارلن تخلیه شماره 1 انتقال دهید .
۱۳- درپوش لاستیکی را به دهنه ارلن تخلیه شماره 1 بزنید .
۱۴- یک طرف شیلنگ سیلیکون را به خروجی ارلن تخلیه شماره 1 و سر دیگر آن را به درپوش لاستیکی سوراخ دار محکم نمایید . و درپوش را در دهنه ارلن تخلیه شماره 2 محکم نمایید .
۱۵- شیلنگ دوم را به خروجی ارلن تخلیه شماره 2 متصل نموده , سر دیگر آن را به پمپ خلأ وصل نمایید .
۱۶- پمپ را جهت بیرون بردن هوای داخل منافذ ژل و همچنین محلول روشن نمایید .
۱۷- ابتدای این کار خروج هوا خیلی زیاد است و کم کم خروج هوا کمتر می شود .
۱۸- تا جایی که قل قل کردن آن کم شود , این کار را ادامه دهید .
۱۹- حال ژل آماده است تا آن را وارد ستون کروماتوگرافی کنیم .
نکته :
۱- جهت نگهداری ژل آماده در یخچال به صورت طولانی در ظرف یا در ستون از محلول مرتیولات یا سدیم آزاید ( ضد میکروب) 0.01 درصد استفاده نمایید .
۲- حتما روی ظرف ژل , تاریخ تهیه ژل , نوع ژل , مقدار ضد میکروب , سازنده , حجم ژل را قید نمایید .
۱- جهت نگهداری ژل آماده در یخچال به صورت طولانی در ظرف یا در ستون از محلول مرتیولات یا سدیم آزاید ( ضد میکروب) 0.01 درصد استفاده نمایید .
۲- حتما روی ظرف ژل , تاریخ تهیه ژل , نوع ژل , مقدار ضد میکروب , سازنده , حجم ژل را قید نمایید .
گزارش :
۱- مشخصات ژل را به صورت برچسب روی ظرف ژل نصب می کنیم .
۲- گزارش تهیه ژل را در دفتر کارهای روزمره آزمایشگاه ثبت می کنیم .
۱- مشخصات ژل را به صورت برچسب روی ظرف ژل نصب می کنیم .
۲- گزارش تهیه ژل را در دفتر کارهای روزمره آزمایشگاه ثبت می کنیم .
هیچ نظری موجود نیست:
ارسال یک نظر