هدف :
آماده سازی و ساخت یک ستون کروماتوگرافی برای جداسازی پروتئین ها , که ژل مناسب بعدا در آن pack خواهد شد .
کاربرد :
کاربرد در کلیه روش های کروماتوگرافی .
مواد و تجهیزات :۱- لوله ای شیشه ای که انتهای آن به صورت قیف است ( خروجی ) و ورودی آن کمی گشاد شده است . ( باید طول شیشه و قطر شیشه متناسب با حجم ژل باشد )
۲- 5 cm شیلنگ متناسب با خروجی ستون .
۳- گیره برای بستن خروجی .
۴- پایه ستون .
۵- گیره برای نصب ستون روی پایه .
۶- پشم شیشه .
۷- لوله شیشه ای نازک به قطر تقریبی cm0.5 الی cm0.7 (طوری که به راحتی داخل ستون شود ) و طولی بلند تر از طول ستون . ۸- درپوش لاستیکی سوراخ دار برای ورودی ستون .
۹- 2 عدد سرسمپلر کوچک (زرد رنگ 100 لاندا)
۱۰- شیلنگ به طول یک متر.
۱۱- یک لوله نازک به طول 10 cm و قطر متناسب با شیلنگ یک متری .
ملاحظات ایمنی :
برای جلوگیری از خطرات بیولوژیک , الرژیک و شیمیایی , پوشیدن روپوش و کفش و دستکش ضروری می باشد .
روش کار :
۱- ستون را به وسیله آب مقطر و سپس استون شستشو دهید .
۲- مقداری پشم شیشه را توسط آب مقطر خیس کرده وارد ستون می کنید .
۳- توسط لوله نازک پشم شیشه را به انتهای ستون رانده ,در حین اینکه پشم شیشه را به انتهای ستون می کو بانید , همزمان ستون را بچرخانید . تا پشم شیشه یک نواخت در انتهای ستون فشرده شود
۴- حال مقداری آب مقطر درون ستون بریزید , تا ذرات خرد شده پشم شیشه را با آن خارج کنید .
۵- مراحل 3 الی 4 را 3 مرتبه تکرارکنید . تا پشم شیشه کاملا فشرده شده و سطح آن یکنواخت شود .
۶- ستون را توسط گیره به پایه ستون متصل نمایید .
۷- حال شیلنگ 5cm را به خروجی ستون وصل کنید .
۸- یکی از سرسمپلر ها را به شیلنگ 5cm وصل کنید . طوری که از نوک آن بعدا بتوان برای وصل کردن به شیلنگ پمپ پریستالتیک استفاده کرد .
۹- شیلنگ خروجی ستون را توسط گیره ببندید . و کمی اب درون ستون بریزید تا پشم شیشه خشک نشود .
۱۰- سرسمپلر دیگر را وارد سوراخ درپوش لاستیکی کرده و نوک آن را درون شیلنگ یک متری محکم نمایید . و درب لاستیکی را داخل ورودی ستون کنید .
۱۱- سر دیگر شیلنگ یک متری را به لوله 10 cm وصل می نماییم .( این لوله ورودی در ظرف بافر قرار خواهد گرفت ) .
گزارش :گزارش تهیه ستون را در دفتر کارهای روزمره آزمایشگاه ثبت می کنیم .
هیچ نظری موجود نیست:
ارسال یک نظر