هدف :
طریقه مناسب وارد کردن نمونه ( نمونه گذاری ) درانواع ستونهای کروماتوگرافی جهت جداسازی پروتئین های نمونه .
کاربرد :
درهمه انواع کروماتوگرافی کاربرد دارد .
مواد و تجهیزات :
۱- ستون کروماتوگرافی همراه ظرف حاوی بافر شستشو و شیلنگ های مرتبط
۲- پیپت cc 2 دو عدد
۳- پیپت cc 10 یک عدد
۴- پیپت مناسب با حجم نمونه
۵- پیپتور
۶- ارلن یا بشر
ملاحظات ایمنی :
برای جلوگیری از خطرات بیولوژیک , الرژیک و شیمیایی , پوشیدن روپوش و کفش و دستکش ضروری می باشد .
روش کار :
۱- بافر روی سطح ژل داخل ستون را خالی می کنیم .
۲- cc1 الی cc2 از نمونه را توسط پیپت cc2 بر می داریم .
۳- به آرامی پیپت را درون ستون وارد می کنیم . طوری که نوک پیپت به نزدیک سطح ژل برسد .
۴- نوک پیپت را به جداره شیشه ستون می چسبانیم .
۵- به آرامی طوری که سطح ژل به هم نخورد , نمونه را خالی میکنیم و همزمان پیپت را دور تا دور شیشه ستون می چرخانیم , سپس می توانیم بقیه نمونه را با پیپت مناسب به آرامی به آن اضافه کنیم . ( نمونه گذاری ) .
۶- در زیر ستون یک ظرف ( ارلن یا بشر) قرار می دهیم .
۷- شیر خروجی ستون را باز می کنیم .
۸- زمانی که سطح نمونه به سطح ژل رسید , دوباره شیر خروجی را می بندیم .
۹- حال با یک پیپت cc2 تمیز حدود cc1 الی 2cc از بافر مورد نظر ( بافرشستشو ) را درست به همان طریق که نمونه را نمونه گذاری کرده اید , به ستون اضافه می کنید . ( هدف از این کار شستشوی شیشه داخلی ستون که آغشته به نمونه است , می باشد ).
۱۰- دوباره شیر خروجی ستون را باز می کنیم .
۱۱- زمانی که سطح بافر به سطح ژل رسید , دوباره شیر خروجی را می بندیم .
۱۲- مرحله 9 را دوباره تکرار می کنیم . اگر بافر روی سطح ژل الوده به نمونه نبود , توسط پیپت 10cc , تا حدود 10 الی 15 سانتیمتر بالا تر از سطح ژل بافر اضافه می کنیم .
۱۳- ورودی ستون را به منبع بافرشستشو متصل می کنیم .وخروجی ستون را باز می کنیم . .(Run)
نکته :
۱- مراحل 1 الی 11 جزء مرحله نمونه گذاری می باشد .
۲- 12 الی 13 جزء مرحله run نمونه می باشد .
۳- حجم نمونه ای که می توان روی ستون های ژل کروماتوگرافی (کروماتوگرافی غربالی ) نمونه گذاری کرد , 5% الی 10% حجم ژل می باشد . ( 5% ایده آل است ) .
۴- حجم نمونه ای که می توان روی ستون های Ion Exchange و Affinity نمونه گذاری کرد , بستگی به ظرفیت جذب آنها دارد .
گزارش :
۱- گزارش کار را در دفتر کارهای روزمره آزمایشگاه ثبت می کنیم .
هیچ نظری موجود نیست:
ارسال یک نظر