کاربر گرامی خانم هاله عطری ,
با سلام
به علت پاره ای از مشکلات در کامپیوتر بنده نتوانستم به شما ای - میل بزنم , لذا جواب شما را به وسیله این پست می دهم. که مشکل بقیه دوستان نیز حل شود .
شما از یک استاندارد که غلظت آن را می دانید استفاده کنید . برای استاندارد از بی اس ا استفاده کنید .مثلا بی اس ا با 5 غلظت 0.1 میلی گرم پر ام ال
BSA 0.1 mg/ml 0.2 mg/ml 0.3 mg/ ml 0.4mg/ml 0.5mg/ml
BSA = bovine Albomin Serum
نمونه های خود را یکی با همان غلظت و دیگری با 1/10 غلظت , دیگری را مثلا با 1/50 درست کنید
حالا باید طبق روش لوری جذب ها را بخوانید .
نمودار خود را بر حسب میلی گرم پر ام ال پروتئین و جذب بکشید .
شما جذب های استاندارد را می خوانید و در روی محور ایگرگ می نویسید . غلظت های استاندارد نیز روی محور ایکس مشخص کنید .
حال بهترین خطی که از این 5 نقطه عبور می کند , یا به صورت دستی یا با نرم افزار اکسل رسم کنید .حال با توجه به جذب نمونه های خود , به طوری که یک خط افقی از جذب مورد نظر رسم می کنید , تا به خط شما برخورد کند و از همان جا یک خط عمودی بکشید تا به محور ایکس شما برسد . جایی را که به محور ایکس برخورد کرده مشخص کنید .این نقطه غلظت پروتئین مورد نظر شما می باشد. سپس عدد به دست آمده را در ضریب رقت خود ضرب کنید.
در این روش از نمونه هایی که در بالا رقیق کرده اید آن نمونه ای را انتخاب کنید که عدد آن بین اعداد استاندارد باشد
مثلا یک نمونه دارید که غلظت آن نا مشخص است
ابتدا از این نمونه چند رقت بسازید
1/1 1/10 1/20 1/50
استاندارد های خود را بسازید
BSA 0.1mg/ml 0.2 mg/ml 0.3 mg/ ml 0.4mg/ml 0.5mg/ml
طبق روش لوری عمل نمایید
یک عکس برای شما اتچ کرده ام به آن دقت کنید
حال استاندارد ها را و همچنین جذب آنها را در نمودار بگذارید
بهترین خط را طبق آن رسم کنید
حال جذب نمونه ها را بخوانید
نمونه ای که جذب آن در محدوده جذب استانداردها است انتخاب کنید ( بقیه آنها دقت کافی را نخواهد داشت
یعنی نقاطی که به خط قهوه ای برسد فاقد اعتبار است
از نقطه ای که جذب آن مشخص است یک خط افقی رسم کنید تا به خط سبز برسید .سپس از آنجا یک خط رسم کنید تا محور ایکس را قطع کند . این نقطه غلظت نمونه شما است .که اگر رقیق کرده باشید , باید این عدد را در ضریب رقت ضرب کنید
در ضمن از اینکه جواب دیر شد ببخشید .کامپیوتر من با مشکلاتی روبرو بود
با تشکر
هیچ نظری موجود نیست:
ارسال یک نظر